Hvað er Peptíð nýmyndun

 

Peptíðmyndun er virkt svið í prótein- og peptíðefnafræði, sem venjulega felur í sér að amínósýrur eru bætt við í röð í skilgreindri röð til að mynda peptíðkeðjuna með efnafræðilegum aðferðum. Helstu nýmyndunaraðferðirnar eru fljótandi fasa og fastfasa nýmyndun. Í samanburði við LPPS hefur SPPS þá kosti að vera hraðari, einfaldari, með færri aukaverkanir og meiri ávöxtun.

 

Hefðbundin SPPS aðferð, þar á meðal Boc (bensýl) og Fmoc (tBu) aðferðir.

 

 

Boc (bensýl) stefnu

Í þessari myndun nálgun eru klórmetýleruð, hýdroxýmetýleruð pólýstýren og p-metoxýbensýl (PMA) kvoða notuð sem fast burðarefni. -Amínóhópurinn er varinn með t-bútoxýkarbónýli (Boc), en hliðarkeðjuhópar amínósýra eru verndaðir með bensýlafleiðum. Boc hópurinn er fjarlægður með því að nota hreint TFA eða TFA í CH2Cl2 og í lok nýmyndunar eru hliðarkeðjuverndarhópar og peptíð-resin tengingar fjarlægðar með sterkri sýru eins og vatnsfríri flúorsýru (HF) eða TFMSA.

 

Fmoc (tBu) stefnu

Í þessari nýmyndunaraðferð eru Wang-resin, 2-Chlorotrityl Chloride Resin, Rink amid-AM Resin, Rink amid-MBHA resín notuð sem fastar stoðir. -Amínóhópurinn er varinn með 9-flúorenýlmetoxýkarbónýli (Fmoc) ), á meðan hliðarkeðjuhópar amínósýra eru verndaðir með sýruóþolnum verndarhópum. Fmoc hópurinn er fjarlægður með því að nota 20% píperidín í DMF og í lok nýmyndunar eru hliðarkeðjuverndarhópar og peptíð-resin tengingar fjarlægðar með 1%-95% TFA. Fmoc SPPS er sem stendur ákjósanlegasta aðferðin fyrir peptíð nýmyndun.

 

Grunnreglur Fmoc fastfasa peptíðmyndunar

 

Veldu Resin

Mest notaða kvoða í Fmoc SPPS, þar á meðal 4-alkoxýbensýlalkóhól (Wang) plastefni, 2-klórtrítýlklóríð plastefni, Rink Amide Resin, Rink Amide-MBHA plastefni. Amíð kvoða eru notuð til að búa til peptíð með nauðsynlegri C-endasamsetningu. Wang plastefni og 2-Cl Trt plastefni eru almennt notuð til að mynda peptíð með nauðsynlegum C-endalausum COOH. En þegar C-enda peptíðsins er með Pro og Gly sem fyrstu amínósýruna, ætti ekki að nota Wang resin vegna hættu á DKP (diketopiperazine) myndun, 2-Mælt er með notkun Chlorotrityl Chloride Resin.

 

 

Tenging verndaðra amínósýra við kvoða

Fyrsta Fmoc amínósýran er tengd við óleysanlegt stuðningsplastefni í gegnum sýruóhæfan tengil.

 

Afverndun -amínóverndarhópsins

Tímabundinn Fmoc verndarhópurinn við N-enda peptíðýl-resinsins er fjarlægður með því að meðhöndla hann með lausn af 20% píperidíni í DMF. Þessi viðbrögð lýkur venjulega innan 10 til 20 mínútna.

 

Þvottaskref

Eftir hver efnahvörf eru þvottaskref framkvæmd til að fjarlægja umfram hvarfefni, aukaafurðir og óhvarfðar sameindir úr plastefninu. Þetta hjálpar til við að viðhalda hreinleika vaxandi peptíðkeðjunnar.

 

Virkjun og tenging vernduðu amínósýrunnar

Verndaða amínósýran sem er bundin við plastefnið er virkjuð til að auka hvarfgirni þess fyrir tengingu við næstu amínósýru í röðinni. Algeng virkjunarefni eru HOAt, HOBt, PyBOP, PyAOP, HBTU og HATU. Tenging felur í sér að mynda peptíðtengi á milli virku amínósýrunnar og amínóhópsins í vaxandi peptíðkeðju. Kaiser próf er venjulega notað til að fylgjast með fullkomleika tengiviðbragða.

 

Þvottaskref

Svipað og í fyrri þvottaskrefum, tryggir þetta að umfram hvarfefni og aukaafurðir séu fjarlægðar eftir tengihvarfið.

 

Klofnun frá plastefni og afverndun hliðarkeðjuverndarhópa

Þegar æskileg peptíð röð hefur verið mynduð á plastefninu er hún klofnuð frá föstu burðarefninu með því að nota klofningskokteil eins og tríflúorediksýru (TFA) sem inniheldur hreinsiefni eins og þíoanísól og vatn. Samtímis eru hliðarkeðjuverndarhópar á amínósýruleifum fjarlægðir, sem leiðir í ljós að fullkomlega afverndað peptíð er tilbúið til hreinsunar og greiningar.